nm23、CD44H和CD44V6蛋白在胃癌的表达及意义
中国普外基础与临床杂志 2000年第3期第7卷 基础与实验研究
作者：金卫中 杨东慧 赵景轩 薛佩莲 钟慧敏
单位：解放军第401医院 青岛 266071
关键词： 胃肿瘤；肿瘤转移抑制基因nm23；细胞表面粘附分子CD44；预后
【摘要】 目的 研究胃癌组织中nm23和CD44的表达，以及与淋巴结转移和预后的关系。方法 应用SP免疫组化技术对105例胃癌组织nm23、CD44H和CD44V6的表达进行观察，并对其中59例患者随访。结果 nm23、CD44H及CD44V6蛋白表达阳性率分别为44.8%、54.3%和48.6%； nm23及CD44V6在胃癌组织的表达与其分化、浸润深度、临床分期和预后有关，而CD44H的表达与上述临床病理指标无关。3种抗体的阳性反应与淋巴结转移有关(nm23 P＜0.05； CD44V6 P＜0.01； CD44H P＜0.05)。结论 CD44H的表达可用于监测病情，而nm23和CD44V6有希望作为一个判断预后的指标。
【中图分类号】 R735.2； Q786 【文献标识码】 A
【文章编号】 1007-9424(2000)03-0141-03
EXPRESSION OF NM23, CD44H AND CD44V6 IN
GASTRIC CARCINOMA AND ITS SIGNIFICANCE
JIN Wei-zhong, YANG Dong-hui, ZHAO Jing-xuan, et al.
（The 401st Hospital of PLA, Qingdao 266071）
【Abstract】 Objective To study the relationship between expression of nm23, CD44 in gastric carcinoma and lymph-node metastasis and prognosis. Methods Expression of nm 23, CD44H and CD44V6 in 105 cases of gastric carcinoma were assayed by immunohistochemistry. Among them, 59 cases were followed up. Results The incidences of nm23, CD44H and CD44V6 protein positivity in gastric carcinoma were 44.8%, 54.3% and 48.6% respectively. The positive expression of nm23, CD44V6 protein in human gastric carcinoma tissues was related to the differentiation, depth of invasion, TNM stage and prognosis (P＜0.05), but expression of CD44H was not correlated with other clinicopathologic indices. The reactivity to these three antibodies were correlate with metastasis of lymph nodes (P＜0.01 for CD44V6 and P＜0.05 for nm23, CD44H). Conclusion Expression of the standard form of CD44 (CD44H) might be useful in observing the progression of the disease, wile CD44V6 and nm23 hold promise as a prognostic indicator.
【Key words】 Stomach neoplasm Anti-metastatic oncogene Cell adhesion molecules Prognosis▲
肿瘤细胞的远处转移是宿主致死的主要原因之一，近年来对肿瘤转移的分子生物学研究已有所进展，发现肿瘤转移抑制基因nm23及细胞表面粘附分子CD44的异常表达与多种恶性肿瘤的生长、转移及预后有关。本实验采用免疫组化技术对105例胃癌组织的nm23、CD44H和CD44V6基因蛋白表达产物进行检测，并结合临床病理特征进一步探讨3者与肿瘤生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源
105例胃癌标本选自我院1988年至1993年外科手术患者(均经病理学证实)，常规取材，10%甲醛固定，石蜡包埋切片，依癌细胞分化程度行Lauren分型，临床分期以新的胃癌TNM分期法标准进行〔1〕。手术后有5年以上随访资料的病例共59例。
1.2 方法
抗nm23多克隆抗体、CD44H和CD44V6单克隆抗体以及SP免疫组化试剂和DAB显示剂均购自福州迈新生物技术公司。采用SP免疫组化染色方法，染色前CD44均经微波行抗原修复，同时各设阳性与阴性对照。阳性结果判断： nm23主要为细胞浆着色，少数位于细胞核内，阳性细胞≥20%为阳性，无阳性细胞或阳性细胞＜20%为阴性，即低表达。CD44H和CD44V6均为细胞膜着色，细胞膜棕色为阳性表达，不着色为阴性。
1.3 统计学处理
本组资料采用χ2检验，以P＜0.05为有显著性意义，P＜0.01为有非常显著性意义。
2 结果
2.1 nm23、CD44H和CD44V6在胃癌中的表达
在105例胃癌组织中，nm23、CD44H和CD44V6免疫组化染色阳性率分别为44.8%(47/105)、54.3%(57/105)和48.6%(51/105)。此外癌旁正常粘膜腺体上皮细胞也见程度不等的阳性染色，而靠粘膜腺体基部CD44H和CD44V6亦呈弱阳性表达。
2.2 nm23、CD44H和CD44V6在胃癌组织中的表达与临床病理关系
结果见附表。在Lauren分型中，细胞分化好的肠型胃癌3者的表达阳性率均明显高于分化差的弥漫型胃癌(P＜0.05)。在淋巴结转移者中，CD44H及CD44V6表达阳性率明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05，P＜0.01)。nm23的表达阳性率在有淋巴结转移者中低于无淋巴结转移者(P＜0.05)。nm23及CD44V6的表达与胃癌细胞浸润、临床分期及5年存活率均有关(P＜0.05)，而CD44H的表达与上述临床病理关系无关(P＞0.05)。
附表 nm23、CD44H和CD44V6与胃癌临床病理的关系
| 临床病理特征 |
n |
nm23表达(%) |
CD44H表达(%) |
CD44V6表达(%) |
| 阳性 |
阴性 |
阳性 |
阴性 |
阳性 |
阴性 |
| Lauren分型 |
| 肠型 |
72 |
38(52.8) |
34(47.2) |
44(61.1) |
28(38.9) |
40(55.6) |
32(44.4) |
| 弥漫型 |
33 |
9(27.3) |
24(72.7) |
13(39.4) |
20(60.6) |
11(33.3) |
22(66.7) |
| 淋巴结转移 |
| 阳性 |
74 |
25(33.8)△ |
49(66.2) |
45(60.8)△ |
29(39.2) |
43(58.1)△△ |
31(41.9) |
| 阴性 |
31 |
22(71.0) |
9(29.0) |
12(38.7） |
19(61.3) |
8(25.8) |
23(74.2) |
| 临床分期 |
| Ⅰ～Ⅱ期 |
33 |
18(54.5)＃ |
15(45.5) |
19(57.6) |
14(42.4) |
10(30.3)＃ |
23(69.7) |
| Ⅲ～Ⅳ期 |
72 |
29(40.3) |
43(59.7) |
38(52.8) |
34(47.2) |
41(56.9) |
31(43.1) |
| 浸润深度 |
| 粘膜及粘膜下 |
9 |
7(77.8)▲ |
2(22.2) |
3(33.3)▲ |
6(66.7) |
2(22.2)▲ |
7(77.7) |
| 肌层 |
24 |
16(66.7)▲ |
8(33.3) |
15(62.5) |
9(37.5) |
7(29.2)▲ |
17(70.8) |
| 浆膜层 |
72 |
24(33.3) |
48(66.7) |
39(54.2) |
33(45.8) |
42(58.3) |
30(41.7) |
| 术后生存＜5年 |
34 |
10(29.4)☆ |
24(70.6) |
21(61.8)☆ |
13(38.2) |
19(55.9)☆ |
15(44.1) |
| 术后生存≥5年 |
25 |
15(60.0) |
10(40.0) |
9(36.0) |
16(64.0) |
7(28.0) |
18(72.0) |
与弥漫型比较， P＜0.05； 与淋巴结转移阴性者比较， △P＜0.05， △△P＜0.01； 与Ⅲ、Ⅳ期比较，＃P＜0.05； 与浸润浆膜层比较， ▲P＜0.05； 与生存≥5年者比较， ☆P＜0.05
3 讨论
肿瘤的转移是一个复杂而多阶段的生物学过程，并受细胞多基因的调控，肿瘤转移抑制基因nm23的主要功能为参与细胞骨架微管蛋白的聚合以及影响G蛋白介导的信号传导途径，从而对细胞的移动、生长、粘连发挥负调节作用〔2〕。本实验结果显示，nm23的低表达与肿瘤细胞分化、临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关，且nm23表达阳性患者的生存率明显高于阴性患者，此结果与国外一些学者在胃癌、肝癌及乳腺癌的研究结果相近〔3，4〕。有学者认为nm23异常表达与胃癌的分化程度无关〔5〕，但本实验资料显示，与分化程度密切的Lauren分型中，高分化的肠型胃癌与低分化的弥漫型癌间差异有显著性意义(P＜0.05)，表明Lauren分型更能确切地反映其生物学特性，这可能与高分化癌中这种抑癌基因丢失较少，而低分化癌细胞中则抑癌基因丢失过多或全部丢失有关。癌组织中nm23的高表达反映出转移抑制基因在肿瘤过程中起着主导作用，是一种反映胃癌患者预后良好的标志。
CD44是一种细胞表面的跨膜性糖蛋白粘附分子，可分为CD44H和CD44V6，前者表达的蛋白分子与透明质酸具有亲和力，后者与肿瘤转移可能具有密切相关性〔6，7〕。研究表明，CD44分子在调节原发性胃癌和转移肿瘤体内发展中起重要作用〔8〕。本组资料显示，CD44H和CD44V6在原发性胃癌中表达阳性率较为接近，CD44V6在肿瘤的表达常表现为易侵犯、易转移及预后差之特点，而CD44H似乎仅表现出肿瘤转移潜能增加，并与其它临床病理学指标无关，表明两型CD44中CD44V6与肿瘤转移的相关性较CD44H为密切〔7，8〕，进一步说明CD44H易表达于胃癌的早期阶段，CD44V6在胃癌的进展期及肿瘤发展的后期更趋向阳性表达，提示表达CD44V6的肿瘤细胞可能获得有利于癌细胞浸润和转移的条件。CD44的表达均表现出与肿瘤细胞分化有关，CD44阳性在腺样结构的肠型胃癌比弥漫型胃癌更常见，这一结果与文献报道相符〔9，10〕，并认为二者表达的基因通路不同或与上皮-钙粘附蛋白(E-cadherin)表达减少有关〔11〕，其真正原因有待进一步研究。
本实验应用免疫组化方法研究转移相关基因nm23和CD44蛋白变化与胃癌临床病理之间的关系，发现nm23低表达及CD44的过度表达与胃癌的淋巴结转移具有相关性； 随访资料表明，nm23高表达者5年存活率高，而CD44V6过度表达者5年存活率较阴性表达者大为降低，提示有转移活性的CD44V6表达的患者预后不良。因此，nm23及CD44表达的异常有可能作为胃癌早期诊断、肿瘤转移或复发的早期监测的生物学标志，对患者的预后估计亦具有临床应用价值。■
【作者简介】 金卫中(1951年-)，男，副主任医师，主要从事肿瘤病理研究。
参考文献
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收稿日期：1999-06-19
修稿日期：1999-11-24
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