胃泌素释放肽前体片段31-98检测对小细胞肺癌的临床意义

　　中华肿瘤杂志2000年第22卷第3期

　　杨谨　李蓉　李昂　李恩孝　王晓琴

　　摘　要　目的　与神经元特异性烯醇化酶(NSE)对照，探讨胃泌素释放肽前体片段31-98(ProGRP31-98)检测对小细胞肺癌(SCLC)的临床意义。方法　采用ELISA检测30例SCLC、30例非小细胞肺癌、15例肺良性疾病、15例正常健康者和10例治疗后SCLC患者血清ProGRP31-98和NSE值。采用ROC曲线确定阈值，比较诊断准确性。结果　SCLC组血清ProGRP31-98值显著高于对照组(P＜0.0001)，广泛期高于局限期(P=0.044)，有远处转移者高于无远处转移者(P＜0.0001)。SCLC ProGRP31-98升高幅度大于NSE。以40 pg/ml和8 μg/L为阈值，SCLC proGRP31-98和NSE敏感性分别为73%和60%,ROC曲线下面积分别为0.963 9±0.018和0.8723±0.036，差异有显著性(P＝0.000 1)。局限期SCLC的二者敏感性分别为67%和47%，ROC曲线下面积分别为0.9565±0.020和0.830 7±0.042，差异有显著性(P＝0.0001)。化疗有效者治疗后ProGRP31-98显著下降(P=0.018)。结论ProGRP31-98是较NSE更为特异、敏感的SCLC肿瘤标志物。

　　主题词：肺肿瘤；癌，小细胞肺；胃泌素释放肽前体片段31-98；肿瘤标志物

　　小细胞肺癌(SCLC)占肺癌的15%～20%，其生长迅速，易早期转移，对放疗和化疗高度敏感，故早期诊断、制定合理治疗方案及评估疗效尤为重要。神经元特异性烯醇化酶(NSE)作为公认的SCLC肿瘤标志物，应用临床多年，在SCLC鉴别诊断、疗效监测和预后判断中起着积极作用。但研究表明，NSE在局限期SCLC阳性率低，非小细胞肺癌(NSCLC)假阳性率高，正常健康者和SCLC水平差异小，溶血标本易出现假阳性等^［1］。胃泌素释放肽前体31-98片段(ProGRP31-98)为人工合成胃泌素释放肽(GRP)基因编码3种GRP前体共同片段，也是近两年研究活跃的新的SCLC肿瘤标志物。我们采取与NSE平行对照方式，探讨ProGRP31-98血清检测对SCLC的临床意义。

　　材料与方法

　　1.样本来源：1998年3月～1999年3月间，我院收治30例初诊SCLC患者，男21例，女9例，年龄28～69岁，其中局限期(LD)和广泛期(ED)各15例；治疗后SCLC患者10例，3例完全缓解(CR)，7例部分缓解(PR)。30例初诊NSCLC患者中，男19例，女11例，年龄32～73岁，其中鳞癌15例，腺癌12例，大细胞未分化癌2例，腺鳞癌1例。以上患者均有病理证实。另外正常健康者15例，肺良性疾病者15例。

　　2.试剂和仪器：ProGRP31-98试剂盒(德国Wak-Chemie公司)，NSE试剂盒(瑞典CanAg试剂公司)，EL-312e全自动酶标仪(美国Bio-Kinetics仪器公司)。

　　3.实验方法：取清晨空腹静脉血3 ml，静置20 min，3 000 r/min离心10 min，吸取血清分装保存于-20℃冰箱，待测。血清ProGRP31-98和NSE测定按试剂盒说明操作。

　　4.统计方法：采用SPSS统计软件，阈值确定和肿瘤标志物诊断水平比较采用ROC曲线^［2］。

　　结果

　　1.血清ProGRP31-98和NSE值：各组血清ProGRP31-98和NSE值详见表1。SCLC组的血清ProGRP 31-98和NSE值均显著高于对照组(P＜0.0001)，其中ED均显著高于LD(P＝0.044，P=0.019)。对照各组二者水平差异无显著性(P＞0.05)。6例有远处转移和24例无远处转移的SCLC proGRP31-98值分别为(2016.8±425.4) pg/ml和(626.0±761.2) pg/ml，NSE值分别为(86.5±59.7)μg/L和(29.9±19.9) μg/L，有远处转移者均显著高于无远处转移者(P＜0.0001，P＜0.001)。SCLC proGRP31-98升高幅度大于NSE，二者均值和正常人均值之比分别为50.7和9.0。

表1　各组血清ProGRP31-98和NSE浓度(X±s)

　　2.血清ProGRP31-98和NSE浓度阈值及在各组中敏感性：ProGRP31-98和NSE检测SCLC rOC曲线(图1)拐点浓度分别为40 pg/ml和8 μg/L，此点兼顾真阳性率和假阳性率的最好比例关系，故将此点定为ProGRP31-98和NSE阈值。SCLC的二者敏感性分别为73%(22/30)和60%(18/30),显著高于对照组(P＜0.0001)。其中LD-SCLC二者敏感性分别为67%(10/15)和47%(7/15)，ED-SCLC二者敏感性分别为80%(12/15)和73%(11/15)；NSCLC的二者敏感性分别为3%(1/30)和13%(4/30)；肺良性疾病的ProGRP31-98均为阴性，NSE敏感性为7%(1/15)；正常健康者二者均为阴性。

图1　ProGRP、NSE检测SCLC与肺良性疾病和NSCLC相比所得ROC曲线

　　3.血清ProGRP31-98和NSE诊断水平比较：ProGRP31-98和NSE检测SCLC的敏感性分别为73%和60%，特异性分别为98%和92%，诊断准确性分别为90%和81%。二者检测SCLC rOC曲线下面积分别为0.963 9±0.018和0.872 3±0.036，差异有显著性(P＝0.0001)。二者检测LD-SCLC ROC曲线下面积分别为0.956 5±0.020和0.830 7±0.042，差异有显著性(P＝0.0001)。

　　4.血清ProGRP31-98和NSE值与近期疗效关系：3例近期疗效CR者，治疗前ProGRP31-98和NSE值分别为(1182.0±741.2) pg/ml和(63.7±47.9) μg/L，治疗后分别为(17.6±16.0) pg/ml和(3.0±2.9)μg/L，治疗后二者值完全降至正常浓度范围。7例近期疗效PR者，治疗前二者值分别为(1222.6±1055.5) pg/ml和(23.7±23.2) μg/L，治疗后分别为(55.8±35.8) pg/ml和(19.3±11.8)μg/L，治疗后二者值亦明显下降，但未完全降至正常浓度范围。治疗前后二者水平差异均有显著性(P＝0.018, p＝0.018)。

　　讨论

　　GRP是正常人脑、胃的神经纤维以及胎儿肺的神经内分泌组织存在的激素。许多SCLC细胞株和肿瘤组织分泌GRP，且富含GRP受体。低水平GRP即可刺激SCLC细胞DNA合成，因而GRP被认为是SCLC的自主生长因子^［3］。胎儿和新生儿支气管上皮内分泌细胞GRP含量丰富。在成人，GRP仅存在于神经组织和一小部分肺的神经内分泌细胞中，且水平较低。SCLC细胞大量异常产生GRP是去分化的表现。但GRP血浆半衰期短，ProGRP31-98是人工合成GRP基因编码产物，血浆含量稳定，实验证实ProGRP31-98水平代表GRP水平和GRP基因表达^［4］。

　　本研究结果表明，ProGRP31-98检测SCLC敏感性、特异性、可靠性均优于NSE。敏感性表现在SCLC proGRP31-98敏感性早期即升高达67%，而NSE敏感性仅为47%；二者LD-SCLC rOC曲线分析表明，ProGRP31-98检测LD-SCLC优于NSE。特异性表现在对照组NSE阳性率波动于7%～13%间，而ProGRP31-98在对照组中阳性率≤3%，说明NSE检测SCLC假阳性率高于ProGRP31-98；二者检测SCLC rOC曲线亦显示这一特点。可靠性表现在SCLC ProGRP31-98值升高明显，为正常人均值的50.7倍，而NSE仅为正常人均值9.0倍。

　　我们与国外各实验室检测ProGRP31-98浓度阈值从33 pg/ml到50 pg/ml不等^［4-6］，原因可能是由于SCLC的异质性。SCLC亚型复杂，在典型的SCLC中尚混有少量不典型鳞状细胞癌或分化不良的腺癌结构。本实验30例SCLC中，伴鳞状分化和伴腺样分化各1例，其血清ProGRP31-98值分别为32.3 pg/ml和17.6 pg/ml，明显低于单纯细胞型的平均表达水平(921.3 pg/ml)。Takada等^［6］研究表明，混合细胞型SCLC proGRP31-98水平显著低于单纯细胞型(P＝0.02)，说明SCLC亚型精确界定的必要性。

　　NSE是反映SCLC病程的良好指标，本组资料亦显示这一特点，但同时也表明ProGRP31-98在监测病情、反映肿瘤负荷和疗效方面具有和NSE相同的作用。ED-SCLC proGRP31-98水平显著高于LD-SCLC，有远处转移者显著高于无远处转移者；而患者治疗前后其水平变化表明，水平下降提示病情好转，而且下降愈明显疗效愈好。新近的资料表明，ProGRP31-98尚可作为提示早期复发和预后的独立指标。Okusaka等^［7］报道，SCLC复发时，94%患者其水平再次升高，较临床症状出现平均提前35天；而NSE升高率为37%，较临床症状出现平均提前20天，二者存在显著差异。此外，据Tsuchiyama等^［8］经生存多因素回归分析，治疗后ProGRP31-98水平和体力状况、年龄为SCLC患者独立预后因素。

　　总之，ProGRP31-98是新的较NSE更为特异、敏感的SCLC肿瘤标志物。对SCLC，特别是LD-SCLC诊断准确性优于NSE，能在一定程度上提高SCLC早期诊断水平，对监测病情、评估疗效、推测预后亦有较高价值。

　　作者单位：杨谨（710061西安医科大学第一附属医院肿瘤内科)

　　李蓉（710061 西安医科大学第一附属医院肿瘤内科)

　　李恩孝（710061 西安医科大学第一附属医院肿瘤内科)

　　王晓琴（710061 西安医科大学第一附属医院检验科)

　　李昂（西安医科大学免疫病理研究室）

　　参考文献

　　1．Ariyoshi y, Kato K, Ishiguro Y, et al. Evaluation of serum neuron-specific enolase as a tumor marker for carcinoma of the lung. Gann, 1983, 74: 219-225.

　　2．Hanley JA, Mcneil BJ. The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology, 1982, 143: 29-36.

　　3．Cuttitta F, Carney DN, Mulshine J, et al. Bombesin-like peptides can function as autocrine growth factors in human small cell lung cancer. Nature,1985,316:823-826.

　　4．Miyake Y, Kodama T, Yamaguchi K, et al. Progastrin-releasing peptide(31-98) is a specific tumor marker in patients with small cell lung carcinoma. cancer Res, 1994, 54:2136-2140.

　　5．Aoyaki K, Miyake Y, Urakami K. et al. Progastrin-releasing peptide(31-98) as tumor marker for small cell lung carcinoma: development and evaluation. Clin Chem, 1995, 41:537-543.

　　6．Takada M, Kusumoki Y, Masuda N, et al. Pro-gastrin-releasing peptide(31-98)as a tumor marker of small-cell lung cancer:comparative evaluation with neuron-specific enolase. Br J Cancer, 1996, 73:1227-1232.

　　7．Okusaka T, Eguchi K, Kasai T, et al. Serum levels of Pro-gastrin-releasing peptide for follow-up of patients with small cell lung cancer. Clin Cancer res,1997, 3:123-127.

　　8．Tsuchiyama T, Kawahaiara M, Naka N, et al. Correlation between the tumor marker Pro-GRP and prognosis in patients with small-cell lung cancer. Nihon kyobu Shikkan Gakkai Zasshi, 1997, 35:616-621.